Siembra de microorganismos

Práctica 5 

Siembra de microoganismos

Objetivos

 

Manipulación de microorganismos en métodos de esterilidad y aprender técnicas de siembra para separar microorganismos.

Fundamentos 

Sembrar es introducir una porción de muestra  en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y multiplicación.

Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento. Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:

- Que se efectúen asépticamente

- Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados

- Que se realicen solo los manipuleos indispensables

- Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. Utilizando para ello un mechero bunsen.

Existen diferentes tipos de medios donde cultivar:

Medios sólidos 

·         Siembra por inmersión: se coloca el inóculo en una placa o caja de Petri y sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este método se utiliza para microorganismos aerobios.

·         Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inóculo. Con ayuda de una espátula de Drigalsky se extiende el inóculo hasta su absorción total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda para microorganismos aerobios estrictos.

·         Siembra en estría: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo fundido y se deja solidificar.

              

Existen distintas técnicas para la siembra en estrías, el objetivo es obtener colonias aisladas:

- Técnica A: Consiste en cargar el ansa con la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta parte de la superficie de la placa, se quema el ansa, se enfría, se gira la placa a 90° y se vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de la placa. Por último, sin quemar el ansa, se estría el resto de la superficie sin sembrar.

- Técnica B: Con el ansa cargada se hacen 3 o 4 estrías; se quema el ansa, se hacen 3 o 4 estrías perpendiculares a las anteriores, se quema el ansa y se repite el procedimiento hasta agotar la superficie de la placa.

     Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: Se colocan 5 ml de medio de cultivo fundido y estéril, se inclina el tubo y se deja enfriar.

El inóculo se siembra, con ayuda de un asa, de la siguiente manera:

En profundidad con ansa de punta: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se introduce mediante punción en el medio contenido en la parte inferior del tubo 

En superficie con ansa de aro: se pica con el ansa el cultivo a sembrar y se esparce el mismo sobre la superficie en bisel en forma de zigzag.

Metodo de siembra en medio líquido: Se trata de, mediante el ansa, colectar microorganismos de la muestra e introducirlos a continuación en un medio de agua peptonada.

Se prepara un volumen de Agua de peptona, de acuerdo a las instrucciones del rotulo y se distribuye en porciones de 9 ml en tubos de ensayo. De igual forma se preparan erlenmeyer conteniendo 90 ml de agua de peptona.

Materiales y reactivos 

·       Erlenmeyer de 250 ml o botella con tapón de rosca

Espátula

Vidrio de reloj

Agar

Peso para pesar la cantidad de agar necesario

Placas Petri estériles

Microondas

Agua destilada

Espátulas de Drigalsky

Ansa de platino

Tubos de ensayo

Muestra a analizar

Algodón y gasa

Agua de peptona

Mechero Bunsen

Permanente

Autoclave

Procedimientos 

Se siguen las instrucciones del rótulo del medio de acuerdo a la cantidad a preparar, haciendo una regla de 3. Se transfiere el medio a un erlenmeyer después de haberlo pesado y ayudándonos de un embudo, una varilla, y el agua destilada establecida. 

Disolvemos los grumos que puedan formarse removiendo la mezcla y la llevamos a ebullición dos o tres veces en el mocroondas .

Se cubre el erlenmeyer con un tapón de algodón envuelto en gasa,con un papel en su interior indicando el tipo de agar utilizado y se cubre con papel albal .

Se esteriliza en el autoclave. Si se utiliza de inmediato, dejar enfriar a temperatura alrededor de 45ºC. En caso de que el medio solidifique, fundirlo nuevamente a baño maría antes de su uso.