Recuento de enterococos fecales por filtración
Objetivos
Contar las UFC/ml de enterococos fecales en 100 ml, 50
ml de agua de muestra y 50 ml de agua destilada estéril (1:1), a través de
filtración al vacío, en un medio Slanetz-Barnley.
Fundamentos
Es el indicador bacteriológico más eficiente para
evaluar la calidad de agua de mar para uso recreativo, debido a que es muy
resistente a las condiciones salinas de este medio y además, está relacionado
directamente con gastroenteritis, enfermedades respiratorias, conjuntivitis y
dermatitis, entre otras.
La presencia de Enterococcus faecalis y E.
faecium es usada frecuentemente para indicar contaminación de origen
fecal, E. faecalis es considerado como un indicador de
contaminación fecal de fuentes humanas, mientras que E. faecium y
otras especies indican contaminación de otras fuentes.
Composición:
Fórmula (en gramos por litro)
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Instrucciones
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Triptona
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20.0
| Disolver 43.5 g de medio en 1 litro de agua bidestilada. Calentar, agitando, hasta ebullición para su total homogeneización. Evitar el excesivo calentamiento y enfriar rápidamente. No autoclavar. El color final del medio es incoloro-paja. El medio rojo indica que ha sufrido exceso de calor.. |
Extracto de levadura
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5.0
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Glucosa
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2.0
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Fosfato dipotásico
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4.0
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Azida sódica
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0.40
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Cloruro de tetrazolio
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0.10
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Agar
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12.0
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pH final: 7.2 ± 0.2
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Materiales y reactivos
Materiales
Mechero
Vasos de precipitado (agua destilada estéril, agua muestra, alcohol)
Embudo
Probeta 100 ml
Pipeta Pasteur
Matraz Kitasato
Alcohol
Agua Destilada Estéril
Placa Petri estéril
Pinzas
Mechero Bunsen
Filtro reticulado
Procedimientos
Primero preparamos los materiales necesarios y limpiamos la mesa con lejía y abundante agua destilada.
A continuación montamos el kitasato, llenamos un vaso de precipitado con alcohol y preparamos el medio, los filtros y encendemos el mechero.
Después cogemos un filtro, abrimos su envoltorio poco a poco y lo cogemos con unas pinzas, siempre y cuando estén flameadas con alcohol, lo colocamos en una placa de petri donde habrá agua esterilizada previamente para que se despegue la cuadrícula de la otra parte, cuando esto ocurra, cogemos la cuadrícula y la ponemos en la parte de abajo del kitasato. Colocamos la parte de arriba del kitasato y echamos el agua de muestra con el agua estéril ya mezclada en una proporción 1:1 para facilitar la filtración.
A continuación pulsamos el botón del aparato que hace vacío para que empiece a absorber el agua e impregnar la cuadrícula. Cuando la filtración haya terminado, con las pinzas flameadas, cogemos la cuadrícula impregnada en bacterias y la pasamos al medio correspondiente, en este caso Slanezt-Barnley, intentado que no queden burbujas.
Por último lo llevamos a la estufa a 40º
Resultados
Microorganismos
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Características de las colonias
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Escherichia coli MKTA 25922
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No crecen
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Bacillus subtilis MKTA 6633
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No crecen
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Enterococcus durans MKTA 10541
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Colonias rosas-granates, pequeñas
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Enterococcus faecalis MKTA 29212
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Colonias rosas-granates, pequeñas
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