Preparación de medios de cultivos

Práctica 3 

Preparación de medios de cultivos 

Objetivos 

El objetivo de la presente práctica es aprender a preparar correctamente los principales medios de cultivo que se utilizan en el laboratorio de microbiología.

Fundamentos 

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente. 

Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales  y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

Los medios de cultivo pues, se pueden utilizar para distintos fines, como por ejemplo:

- Separación y aislamiento de microorganismos presentes en una muestra.

- Paso previo para la identificación de un microorganismo problema. Se pueden obtener         cultivos puros (axénicos) a partir de colonias aisladas.

-Conocer el tipo de metabolismo en función de los nutrientes que utiliza o los metabolitos       que produce.

-Estudios macroscópicos, es decir, de las características de las colonias en medio sólido.

-Realización de antibiogramas.

-Pruebas de concentración mínima inhibitoria (CMI)

-Conservación de especies.

Los agares que utilizamos para el cultivo de los microorganismos están formados de una serie de componentes en común.

1. Nutrientes energéticos: Fuente de carbono y fuente de nitrógeno

2. Nutrientes no energéticos: Agua, sales minerales, fuente de azufre y fuente de fósforo 

Otros componentes: Agentes solidificantes, tampones, indicadores de pH, factores de crecimiento, agentes reductores, factores inhibidores, inhibidores de Gram +, inhibidores de Gram -, inhibidores de microorganismos no entéricos y antibióticos.

A la hora de preparar medios de cultivo, tenemos que tener en cuenta los distintos tipos de cultivos que hay:

Según su consistencia: Líquidos, sólidos y semisólidos 

Según su composición: Definidos y complejos 

Según su utilidad: Medios generales, medios enriquecidos, medios selectivos, medios diferenciales y medios de transporte y conservación 

Según el recipiente donde vayamos a echar nuestro medio de cultivo, serán diferentes los procesos: Medios sólidos en placa, medios sólidos en tubo inclinado, también conocidos como pico de flauta o slant, y medios líquidos 

Materiales y reactivos 

Materiales

Matraz Erlenmeyer

Botella de medios

Varilla

Microondas

Embudo 

Placas petri 

Tubos de ensayo

Mechero bunsen

Peso 

Guante protector 

Reactivos

Agua destilada

Agar específico 

Procedimiento 

En primer lugar cogemos el agar correspondiente y calculamos cuanto nos hace falta según los ml que vayamos a hacer.

Pesamos el agra necesario y lo mezclamos en un matraz Erlenmeyer o en una botella de medios con ayuda de un embudo y una varilla.

Más tarde removemos bien y lo llevamos al microondas hasta que ebulla varias veces. Cuando esto pase en el caso de que sea un matraz, improvisamos un tapón con algodón y una gasa, en el caso de que sea la botella cerramos el tapón 3/4. Hemos hecho esto para meterlo en el autoclave y esterilizar el medio. Cuando termine el autoclave sacamos los medios y emplatamos cuando el medio este frío y lo dejamos solidificar cerca de un mechero bunsen. Después al frigorífico. 

Cálculos 

El único cálculo que tenemos que realizar en esta práctica, es básicamente realizar una regla de tres para poder saber qué cantidad de agar o de caldo le corresponde a los mililitros que nos estén pidiendo.