Recuento coliformes totales por filtración

Práctica 11 

Recuento de coliformes totales por filtración 

Objetivos 

Contar las UFC/ml de coliformes totales en 100 ml de muestra, a través de filtración al vacío, en un medio ENDO. Comprender y realizar adecuadamente la determinación de coliformes totales en un medio. Interpretar los resultados obtenidos, de acuerdo con las normas aplicables.

Fundamentos 

En el medio de cultivo, la pluripeptona junto con la peptona, la tripteína y el extracto de levadura, aportan los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable. El fosfato dipotásico y el fosfato monopotásico otorgan la capacidad buffer, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
Es un medio selectivo debido al lauril sulfato de sodio y al desoxicolato de sodio que inhiben el desarrollo de la flora acompañante, y es diferencial debido a la fermentación de la lactosa. 
Las bacterias fermentadoras de lactosa producen durante la fermentación aldehídos, que en combinación con la fucsina y el sulfito presentes en el medio le confieren a la colonia un brillo metálico, mientras que las colonias de las no fermentadoras son rosadas.

Composición:

Fórmula (en gramos por litro)
Pluripeptona	10.0
Peptona	5.0
Tripteína	5.0
Extracto de levadura	1.5
Lactosa	12.5
Cloruro de sodio	5.0
Fosfato dipotásico	4.375
Fosfato monopotásico	1.375
Lauril sulfato de sodio	0.05
Desoxicolato de sodio	0.1
Sulfito de sodio	2.1
Fucsina básica	1.05
pH final: 7.2 ± 0.2

Materiales y reactivos 

Materiales 

Vaso de precipitado x2 (agua muestra, alcohol)

Embudo

Probeta 100 ml

Pipeta Pasteur

Matraz Kitasato

Alcohol

Placa Petri estéril

Pinzas

Mechero Bunsen

Mechero

Filtro reticulado

Procedimientos 

Primero preparamos los materiales necesarios y limpiamos la mesa con lejía y abundante agua destilada.

A continuación montamos el kitasato, llenamos un vaso de precipitado con alcohol y preparamos el medio, los filtros y encendemos el mechero.

Después cogemos un filtro, abrimos su envoltorio poco a poco y lo cogemos con unas pinzas, siempre y cuando estén flameadas con alcohol, lo colocamos en una placa de petri donde habrá agua esterilizada previamente para que se despegue la cuadrícula de la otra parte, cuando esto ocurra, cogemos la cuadrícula y la ponemos en la parte de abajo del kitasato. Colocamos la parte de arriba del kitasato y echamos el agua de muestra con el agua estéril ya mezclada en una proporción 1:1 para facilitar la filtración. 

A continuación pulsamos el botón del aparato que hace vacío para que empiece a absorber el agua e impregnar la cuadrícula. Cuando la filtración haya terminado, con las pinzas flameadas, cogemos la cuadrícula impregnada en bacterias y la pasamos al medio correspondiente, en este caso ENDO, intentado que no queden burbujas. 

Por último lo llevamos a la estufa a 37º

Resultados 

Microorganismos	Crecimiento	Características de las colonias
Escherichia coli ATCC 25922	Bueno	Brillo metálico
Proteus mirabilis ATCC 43071	Bueno	Incoloro
Staphylococcus aureus ATCC 25923	Inhibido	------